Триколор как войти в личный кабинет: Триколор — официальный сайт

Выделение клона кДНК холинмонооксигеназы из амаранта трехцветного и его экспрессия в условиях стресса A. tricolor является основным сортом овощных и декоративных культур и широко культивируется в мире. Осмопротектор глицин бетаин (ГБ) обнаружен у Amaranthaceae, A. Hypochondriacus L

2 и A. Caudatus L 3 , 4 . ГБ широко распространен и является эффективным осмопротектором для многих растений 3 . Нами изучен механизм фотосинтетической адаптации A. tricolor в условиях солевого стресса за счет накопления GB 5 .

ГБ синтезируется двухстадийным окислением холина. Первый этап катализируется холинмонооксигеназой (ХМО), которая до сих пор изучалась только у Chenopodiaceae, шпината и сахарной свеклы. Затем кДНК, кодирующие белки CMO, были клонированы из обоих видов 4 , 6 , и полученные аминокислотные последовательности показали 84% идентичность. CMO шпината представляет собой стромальную Fd-зависимую монооксигеназу с центром [2Fe-2S] типа Риске 7 и полностью отличается от ферментов бактериальной холиндегидрогеназы и оксидазы. Предполагалось, что CMO уникальна среди растительных оксигеназ 6 , 8 . Второй этап синтеза ГБ опосредуется бетаинальдегиддегидрогеназой (БАДГ) 1 , которая хорошо описана в амаранте 2 , 9 и других растениях 10, 11, 12, 13, 14 .

Экспрессия CMO и BADH в листьях шпината, а также в листьях и корнеплодах сахарной свеклы 4 , 6 , 7 регулировались солевым и засушливым стрессами. Впервые было известно, что A. caudatus L. в дополнение к Chenopodiaceae накапливает ГБ и экспрессирует белок CMO в условиях солевого стресса 5 .

В настоящей работе мы исследовали белки CMO у видов Chenopodiaceae и Amaranthaceae, накапливающих ГБ. Кроме того, мы исследовали экспрессию CMO, белков BADH и содержание ГБ у A. tricolor в условиях экологических стрессов, включая соль, засуху, холод, жару и экзогенное применение АБК. Мы также выделили кДНК CMO из библиотеки кДНК A. tricolor.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Семена A. tricolor, A. caudatus, A. hypochondriacus, Spinacia oleracea, Suaeda japonica и Atriplex ssp.gmelini проращивали, и их проростки выращивали в условиях, описанных Wang et al. 5 . 6-недельные растения A. tricolor подвергались следующим обработкам соответственно: 300 мМ NaCl в течение 5 дней, засуха путем воздержания от воды в течение 10 дней, холод (4°C) в течение 8 дней и тепловой стресс (42°C). ) в течение 3 д. Опрыскивали 100 мм АБК в воде по поверхности всех листьев до стекания раствора, повторяли опрыскивание 3 раза, далее растения росли 5 дней. Измерения белка и ГБ проводили, как описано ранее 5 .

Клонирование кДНК

Суммарную РНК из засоленных листьев A. tricolor экстрагировали, как описано Yamamoto et al. 15 . Фрагмент ДНК размером 947 п.н. был получен с использованием ПЦР с обратной транскрипцией с вырожденными праймерами. Обратный и прямой праймеры представляли собой: 5′-TCYAARGGNTGGCARGTNGCNGG-3′; и 5′-CCARCARTGRAARTGRTGDATNCC-3′ соответственно. Поли(А)РНК выделяли с помощью системы выделения мРНК PolyATtract Series 9600 ™ (Promega, США) и использовали для конструирования библиотеки кДНК (1×10 6 бляшкообразующих единиц) в UniZap XR (Stratagene, США). Для скрининга библиотеки кДНК были синтезированы специфические праймеры. Прямой праймер и обратный праймер: 5-GATGGCAAGTCGCAGGATATAG-3 и 5′-AGCAATGGAAATGATGGATTCCT-3′ соответственно. Библиотеку подвергали скринингу с использованием метода ПЦР-96-луночных планшетов, как описано ранее 16 . Последовательности ДНК определяли с помощью готового реакционного набора BigDye Terminator Cycle Sequencing (PE-ABI, Warrighton, UK). Последовательность анализировали с использованием PC-GENE (TM IntelliGentics Inc., Швейцария).

ДНК-блот-анализ

ДНК была выделена из листьев A. tricolor по методу, описанному Chen et al 17 . ДНК расщепляли и денатурировали в геле и переносили на мембрану Hybond-N + (Amersham, Великобритания). Фрагмент кДНК СМО размером 1308 п.н., расщепленный BamHI и Xba I, использовали в качестве зонда. Затем использовали стандартный протокол для гибридизации ДНК 18 .

SDS-PAGE, нативный PAGE и иммуноблот-анализ

Антисыворотки кроликов были получены против BADH и CMO, как описано ранее 5 . Чтобы определить экспрессию обоих белков при различных стрессах, общие белки экстрагировали из листьев A. tricolor в соответствии с установленным методом 5 и разделяли с помощью 12,5% SDS-PAGE. Для сравнения молекулярной массы CMO и ее субъединиц между A. tricolor и шпинатом белки экстрагировали из засоленных листьев в ранее описанном буфере 9.0007 5 с добавлением 10–25 мМ PMSF и 1–10 мМ NEM, затем разделяли с помощью 12,5% SDS-PAGE или 10% нативного PAGE и переносили на нитроцеллюлозную мембрану (Amersham, UK).

РЕЗУЛЬТАТЫ

Выделение клона кДНК холинмонооксигеназы

Библиотеку кДНК получали с использованием мРНК из засоленных листьев A. tricolor и подвергали скринингу методами ПЦР 16 . Была получена полноразмерная кДНК длиной 1643 п.н., кодирующая полипептид из 442 аминокислот. Эта кДНК имеет 5′- и 3′-нетранслируемые области размером 54 п.н. и 260 п.н. ДНК и выведенная аминокислотная последовательность показаны на рис. 1. Когда нуклеотидная последовательность и выведенная аминокислотная последовательность были выровнены с таковыми из СМО шпината и сахарной свеклы, их идентичность достигла 73,6% и 75,7% на уровне нуклеотидов; 690,4% и 69,5% на уровне аминокислот соответственно. Сравнение N-концевой области CMO A. tricolor с участками сахарной свеклы и шпината позволяет предположить, что они очень похожи и имеют типичный аминокислотный состав (рис. 2). Аминокислотная последовательность CMO A. tricolor обладает характеристиками транзитного пептида, который нацеливает полипептид на хлоропласт 19 . Клон CMO A. tricolor разделяет две консенсусные последовательности со шпинатом 6 и CMO сахарной свеклы 4 : одна представляет собой Cys-X-His-X 15-17 -Cys-X-X-His, который координируется с кластером [2Fe-2S] типа Риске. Другая представляет собой последовательность, содержащую координационные центры мононуклеарного негемового Fe: Glu/A sp- X 3-4- A sp- X 2- His-X 4-5 -His 20, 21 .

Рисунок 1

Нуклеотидная и выведенная аминокислотная последовательности кДНК CMO из A. tricolor. Область связывания кластера железо-сера [2Fe-2S] одиночного типа Риске подчеркнута, прямоугольниками отмечены консервативные остатки пар Cys-His. Консервативные остатки мононуклеарного Fe-связывающего мотива подчеркнуты двойным подчеркиванием, а серые прямоугольники указывают на консервативные остатки. Звездочка показывает сайт процессинга N-концевого остатка, соответствующего зрелому полипептиду CMO шпината 9.0007 6 . Регистрационный номер нуклеотидной последовательности CMO A. tricolor: AF290974.

Изображение полного размера

Рисунок 2

Сравнение полученных аминокислотных последовательностей 5′-транзитных пептидов CMO из A. tricolor, Spinacia oleracea L. 6 и Beta vulgaris L. 4 . Серые прямоугольники обозначают идентичные аминокислоты. Звездочка указывает сайт процессинга N-концевого остатка, соответствующего зрелому полипептиду CMO шпината 6 . Цифры справа относятся к аминокислотным остаткам.

Полноразмерное изображение

Гель-блот-анализ геномной ДНК

Геномная ДНК A.tricolor расщепляли BamH I, EcoRI, Hind III и Xba I. Блот-анализ выявил отдельные полосы, которые представляют фрагменты расщепления BamH I, EcoRI и Xba I, соответственно, и две полосы, представляющие Hind III. фрагмент переваривания (рис. 3а). Сайты расщепления кДНК CMO эндонуклеазами рестрикции указывают на наличие двух сайтов Hind III, один на уровне 743, а другой на уровне 1430 п.н. (фиг. 3b). Это показало, что ген CMO содержит интрон(ы) между двумя сайтами Hind III, и одна копия гена CMO присутствует в геноме A. tricolor.

Рисунок 3

( A ) ДНК-блот-анализ геномной ДНК A. tricolor. 10 мг геномной ДНК расщепляли Bam HI, Eco RI, Hind III и Xba I, соответственно, разделяли на 1% агарозном геле, переносили на мембрану Hybond-N + и гибридизовали с кДНК CMO, меченной 32 P. зонд. Зонд представлял собой фрагмент длиной 1308 п.н., расщепленный Bam H I-Xba I. Дорожки следующие: B, Bam H I; Э, Эко РИ; H, Hind III и X, Xba I. Цифры справа представляют собой маркеры молекулярной массы λ -ДНК, расщепленная Hind III, в т.п.н. ( B ) Полная длина кДНК A. tricolor и ее частичная рестрикционная карта. Жирные линии обозначают кДНК, двойные линии — ДНК вектора. Цифры указывают сайты расщепления эндонуклеазами рестрикции в кДНК. Сайт рестрикции расщепления: B, Bam H I; Е, ЭкоР I; H, Hind III и X, Xba I.

Изображение в полный размер

CMO у разных видов

Мы исследовали белок CMO у нескольких видов Amaranthaceae и Chenopodiaceae с помощью иммуноблоттинга. Белки CMO могли быть обнаружены и показали субъединицы с различной молекулярной массой (фиг. 4A и 4B). Субъединица CMO A. tricolor имела более низкую молекулярную массу, чем у двух других растений Amaranthaceae, A. caudatus L. и A. hypochondriacus L. (рис. 4A). Субъединицы CMO шпината показали более высокую молекулярную массу у трех видов Chenopodiaceae, Spinacia oleracea L. Suaeda japonica и Atriplex ssp. Гмелини (рис. 4В). Тем временем мы сравнили субъединицы CMO A. tricolor и шпината и обнаружили, что молекулярная масса субъединицы CMO A. tricolor была ниже, чем у CMO шпината. Напротив, результаты нативного электрофореза в электрофорезе показали, что молекулярная масса CMO A. tricolor выше, чем у шпината (рис. 5).

Рисунок 4

Иммуноблот-анализ CMO. Суммарные белки (100 мк г) из листьев разделяли с помощью SDS-PAGE и подвергали иммуноблотингу с использованием антител против CMO. Растения обрабатывали 300 мМ NaCl в течение 5 дней. Дорожки следующие: ( A ) A. tricolor (дорожка 1), A. caudatus L. (дорожка 2), A. hypochondriacus L. (дорожка 3). ( B ) Шпинат (Spinacia oleracea L.) (дорожка 1), Suaeda japonica (дорожка 2), Atriplex ssp. Gmelini (дорожка 3), A. tricolor (дорожка 4).

Полноразмерное изображение

Рисунок 5

Иммуноблот-анализ CMO и его субъединицы. Суммарные белки (100 мк г) из листьев разделяли с помощью SDS-PAGE (A) и нативного геля (B) с последующим иммуноблоттингом с антителами против CMO. Шестинедельные проростки A. tricolor (а) и Spinacia oleracea L. (s) обрабатывали 300 мМ NaCl в течение 5 дней. Сообщаемые молекулярные массы были средними из 3-5 повторных измерений.

Полноразмерное изображение

Экспрессия CMO в стрессовых условиях

Чтобы получить больше информации о регуляции экспрессии CMO, влияние нескольких типов абиотических стрессов на экспрессию CMO и BADH оценивали с помощью иммуноблот-анализа. Результаты показали, что экспрессия белка CMO значительно увеличивалась при воздействии соли, засухи и теплового стресса (фиг. 6А). Максимальная реакция наблюдалась в листьях, подвергшихся тепловому стрессу, где через 3 дня после обработки содержание белка КМО было самым высоким среди таковых при других обработках. По сравнению с изменениями содержания КМО изменения содержания БАД были не столь значительны. Базальное количество белка БАДГ было выше у не подвергавшихся стрессу растений. Самые высокие уровни GB также были обнаружены при тепловом стрессе (рис. 6C), за которым следовали солевой и засушливый стрессы, сопровождающиеся измененным характером экспрессии белков CMO и BADH (рис. 6A, 6B). При лечении холодом и АБК таких изменений не наблюдалось.

Рисунок 6

Накопление CMO (A), BADH (B) и глицина бетаина (C) в A. tricolor при нескольких абиотических стрессах. Равные количества (100 мкг г для CMO, 50 мкг г для BADH) общего белка анализировали на SDS-PAGE и проводили иммуноблоттинг с антителами против CMO и против BADH. Контрольные растения (дорожка 1) и растения в условиях солевого стресса, индуцированного 300 мМ NaCl в течение 5 дней (дорожка 2), засухи в течение 10 дней (дорожка 3), обработки 100 мМ АБК в течение 5 дней (дорожка 4), обработки холодом (4°C) в течение 8 дней (дорожка 5) и тепловой стресс при 42°C в течение 3 дней (дорожка 6). Содержимое ГБ было средним из 5 повторных измерений.

Увеличить

ОБСУЖДЕНИЕ

Белок CMO обнаружен у A. tricolor, а его кДНК выделена из A. tricolor, помимо семейства Chenopodiaceae. Поскольку Amaranthaceae филогенетически близки к Chenopodiaceae, нуклеотидные и выведенные аминокислотные последовательности их CMO обнаруживают высокую идентичность с CMO шпината и сахарной свеклы. CMO шпината и сахарной свеклы имеют 60 и 65 остатков, которые нацелены на строму 4 . Судя по участкам процессинга шпината и сахарной свеклы, A. tricolor может иметь транзитный пептид из 58 остатков.

Результаты SDS-PAGE и нативного PAGE показали, что A. tricolor CMO состоит из субъединиц (рис. 5). Четвертичная структура CMO не ясна. CMO шпината может быть гомодимером, состоящим из субъединиц около 43 кДа, но нельзя исключать возможность дополнительных субъединиц 7 , 8 . Хотя выведенная аминокислотная последовательность кДНК CMO A. tricolor аналогична молекулярной массе последовательности шпината, ее субъединица весила меньше, чем субъединица CMO шпината из этого исследования (рис. 5). Когда в буфер для экстракции добавляли PMSF и NEM, чтобы предотвратить денатурацию и деградацию белка, снова появлялись те же результаты. Разница в молекулярном весе субъединиц CMO у нескольких видов Amaranthaceae и Chenopodiaceae указывает на возможность различных сайтов процессинга среди предшественников CMO (рис. 4). Из-за низкого количества ЦМО у A. tricolor было затруднено определение места процессинга и субъединичного состава его ЦМО.

В этом исследовании экспрессия CMO и BADH у A.tricolor при тепловом, солевом и засушливом стрессе (рис. 6) показала, что экспрессия как CMO, так и BADH была индуцируемой. Эти результаты показали, что ферменты, участвующие в синтезе ГБ, увеличиваются за счет синтеза белка de novo в условиях стресса. По сравнению с изменениями содержания КМО изменения содержания БАДГ были не столь значительны. BADH не были субстрат-специфическим ферментом, который имел побочные эффекты метаболизма полиаминов и 3-диметилсульфонилпропионата, чем на изменение самого пути ГБ 22 , 23 . Настоящие результаты и результаты дополнительного исследования (которое будет опубликовано в другом месте) позволяют предположить, что CMO играет ключевую роль и непосредственно участвует в синтезе ГБ у A. tricolor.

Абсцизовая кислота (АБК) обеспечивает устойчивость растений к высыханию и участвует в их реакции на другие абиотические стрессы, такие как соль, холод и жара 24 . Хорошо задокументировано, что АБК является важным посредником в реакции растений на стрессы окружающей среды 25 . Обработка АБК и засухой может спровоцировать повышение уровней мРНК БАДГ и содержания белка БАДГ в листьях ячменя при низкой температуре, но результаты показали низкий уровень накопления ГБ 9.0007 12 , 26 . Naidu et al. 27 сообщили, что концентрация накопленного бетаина в проростках пшеницы, подвергшихся холодовому стрессу, увеличилась более чем вдвое в контроле. В этом исследовании холодовой стресс (4°C) и обработка АБК не влияли на экспрессию CMO и BADH у A. tricolor.

Ген CMO в геноме A. tricolor индуцируется несколькими типами стрессовых факторов. Обширные исследования его промотора позволят лучше понять молекулярный механизм функции гена синтеза ГБ. Характеристика промотора станет возможной для эффективной генной инженерии стрессоустойчивости растений.

Сокращения

БАДХ:

бетаинальдегиддегидрогеназа

Директор по маркетингу:

холинмонооксигеназа

ГБ:

глицин бетаин

ABA:

абсцизовая кислота

PMSF:

фенилметилсульфонилфторид

НЭМ:

N-этилмалеимид

СТРАНИЦА:

электрофорез в полиакриламидном геле

п. н.:

пара оснований

КБ:

килобазы

кДа:

килодальтон

Ссылки

  1. Rhodes D, Hanson AD . Четвертичные аммониевые и третичные сульфониевые соединения в высших растениях. Ann Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 1993; 44 :357–84.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  2. Валенсуэла-Сото Э.М. и Mun’oz-Clares, R.A. Очистка и свойства бетаинальдегиддегидрогеназы, экстрагированной из отдельных листьев Amaranthus hypochonodriacus L., подвергнутых водному дефициту. J Plant Physiol 1994; 143 :145–52.
    КАС

    Google ученый

  3. Веретильник Э. А., Беднарек С., МакКью К.Ф., Родс Д., Хэнсон А.Д. Сравнительные биохимические и иммунологические исследования пути синтеза глицина-бетаина в различных семействах двудольных растений. Планта 1989; 178 :342–52.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  4. Рассел Б.Л., Ратинасабапати Б. и Хэнсон А. D. Осмотический стресс вызывает экспрессию холинмонооксигеназы в сахарной свекле и амаранте. Завод Физиол 1998; 116 :859–65.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  5. Wang Y, Meng YL, Ishikawa H et al. Фотосинтетическая адаптация к солевому стрессу у трехцветных листьев растения С4 Amranthus tricolor. Физиол клеток растений 1999; 40 :668–74.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  6. Rathinasabapathi B, Burnet M, Russell BL et al. Холинмонооксигеназа, необычный фермент железо-сера, катализирующий первую стадию синтеза глицина-бетаина в растении: характеристика простетической группы и клонирование кДНК. Proc Natl Acad Sci USA 1997; 94 :3454–8.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  7. Brouquisse R, Weigel P, Rhodes D, Yocum CF Hanson AD . Доказательства наличия ферредоксин-зависимой холинмонооксигеназы из стромы хлоропластов шпината. Завод физиол. 1989; 90 :322–9.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  8. Бернет М., Лафонтен П.Дж., Хэнсон А.Д. Анализ, очистка и частичная характеристика холинмонооксигеназы из шпината. Завод физиол. 1995; 108 :581–8.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  9. Легариа Дж., Райсбаум Р., Муноз-Кларес Р.А., Вильегас-Сепульведа Н. , Симпсон Дж., Итурриага Г. Молекулярная характеристика двух генов, кодирующих бетаинальдегиддегидрогеназу амаранта. Экспрессия в листьях при кратковременном воздействии осмотический стресс или абсцизовая кислота Ген 1998; 218 :69–76

    Статья
    КАС

    Google ученый

  10. Веретильник Э.А., Хэнсон А.Д. Молекулярное клонирование бетаин-альдегиддегидрогеназы растений, фермента, участвующего в адаптации к засолению и засухе. Proc Natl Acad Sci USA 1990; 87 :2745–9.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  11. МакКью К.Ф., Хэнсон А.Д. Индуцируемая солью бетаинальдегиддегидрогеназа из сахарной свеклы: клонирование и экспрессия кДНК. Завод Мол Биол 1992; 18 :1–11.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  12. Ишитани М. , Накамура Т., Хан С.И., Такабэ Т. . Экспрессия гена бетаинальдегиддегидрогеназы в реакции ячменя на осмотический стресс и абсцизовую кислоту. Завод Мол Биол 1995; 27 :307–15.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  13. Вуд А.Дж., Санеока Х., Родс Д., Джоли Р.Дж., Голдсбро П.Б. Бетаинальдегиддегидрогеназа сорго. Завод Физиол 1996; 110 :1301–8.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  14. Накамура Т., Йокота С., Мурамото Ю. и др. Экспрессия гена бетаинальдегиддегидрогеназы в рисе, неаккумуляторе глицинебетаина, и возможная локализация его белка в пероксисомах. Завод J 1997; 11 :1115–20.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  15. Yamamoto N, Mukai Y, Matsuoka M et al. Светонезависимая экспрессия генов cab и rbcS в темных сеянцах сосны. Завод Физиол 1991; 95 :379–83.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  16. Альфандари Д., Даррибер Т. . Простой метод ПЦР для скрининга библиотек кДНК. Применение методов ПЦР 1994; 4 :46–9.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  17. Chen XY, Chen Y, Heinstein P, Davisson JV. Клонирование, экспрессия и характеристика (+)-d-кадиненсинтазы: катализатор биосинтеза фитоалексина хлопка. Арх. Биохим Биофиз 1995; 324 :255–66.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  18. Футтерер Дж., Гизель А., Иглесиас В. и др. Стандартные молекулярные методы анализа трансгенных растений. В: Потрикус И. и Спангенберг Г. (ред.) Перенос генов растениям. Springer, Берлин, 1995 г.; стр. 215–63.

    Глава

    Google ученый

  19. Клайн К. , Генри Р. Импорт и маршрутизация белков хлоропластов, кодируемых ядром. Ann Rev Cell Develop Biol 1996; 12 :1–6.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  20. Цзян Х., Паралес Р.Э., Линч Н.А., Гибсон Д.Т. Сайт-направленный мутагенез консервативных аминокислот в альфа-субъединице толуолдиоксигеназы: потенциальные моноядерные координационные сайты негемового железа. J Бактериол 1996; 178 :3133–9.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  21. Грей Дж., Клоуз П.С., Бриггс С.П., Джохал Г.С. Новый супрессор гибели клеток у растений, кодируемый геном L1s1 кукурузы. Сотовый 1997; 89 : 25–31.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  22. Троссат С., Ратинасабапати Б., Хэнсон А.Д. Трансгенно экспрессируемая бетаинальдегиддегидрогеназа эффективно катализирует окисление диметилсульфониопропионового альдегида и w-аминоальдегидов. Физиол. растений 1997; 113 :1457–61.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  23. Войтехова М., Хэнсон А.Д. и Munoz-Clares, R.A. Бетаин-альдегиддегидрогеназа из листьев амаранта эффективно катализирует НАД-зависимое окисление диметилсульфониопропионового альдегида до диметилсульфониопропионата. Arch Biochem Biophys 1997; 337 :81–8.

    Артикул

    Google ученый

  24. Ингрэм Дж. и Бартельс Д. Молекулярные основы устойчивости растений к обезвоживанию. Ann Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 1996; 47 :377–403.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  25. Zeevaart JAD, Крилман Р.А. Метаболизм и физиология абсцизовой кислоты. Ann Rev Plant Physiol Plant Mol Biol 1988; 39 :439–73.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  26. Кишитани С. , Ватанабэ С., Ясуда С., Аракава К., Такабэ Т. . Накопление глицинабетаина в процессе холодовой акклиматизации и морозоустойчивости в листьях растений озимого и ярового ячменя. Plant Cell Environ 1994; 17 :89–95.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

  27. Найду Б.П., Палег Л.Г., Аспиналл Д., Дженнингс А.С., Джонс Г.П. Накопление аминокислот и глицина бетаина в проростках пшеницы, подвергшихся холодовому стрессу. Фитохимия 1991; 30 :407–9.

    Артикул
    КАС

    Google ученый

Скачать ссылки

Благодарности

Мы благодарим доктора X.Y. Chen (Шанхайский институт физиологии растений, Academia Sinica) за поддержку работы, а также сотрудникам его лаб. за помощь и обсуждение.

Информация об авторе

Авторы и организации

  1. Сельскохозяйственный факультет Университета Мейдзё, Темпаку-ку, Нагоя, 468-8502, Аити, Япония

    Yu Ling MENG & Naosuke NII

  2. Колледж биотехнологии Yingdong, Shaoguan University, Datang Road, Shaoguan, 512005, China

    Yu Mei WANG

  3. Центр сельскохозяйственных наук Шанхая Лаборатория генетической селекции, 2901 Beidi Road, Shanghai, 201106, China

    Da Bing ZHANG

Авторы

  1. Yu Ling MENG

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в
    PubMed Google Scholar

  2. Yu Mei WANG

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в
    PubMed Google Scholar

  3. Da Bing ZHANG

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в
    PubMed Google Scholar

  4. Naosuke NII

    Просмотр публикаций автора

    Вы также можете искать этого автора в
    PubMed Google Академия

Автор, ответственный за переписку

Наоске НИИ.

Права и разрешения

Перепечатка и разрешения

Об этой статье

Barilla 12 oz. Трехцветная паста Penne Rigate

Рейтинг 5 из 5 звезд

Прочитать 2 отзыва

Номер позицииАртикул #: 112bar9787

Скидки Mix & Match

Скидки за количество

Купите 3 или более 017

0626 Поставляется бесплатно с Plus

Купить 1 — 2 30,49 $ за коробку

Сообщите мне, когда этот товар снова появится на складе

Мы не будем добавлять вас в наш список адресов электронной почты или делиться вашими данными.

Доступное количество

30,49 $ 16 шт./кор 2,89 $ Каждая

  • Изготовлено из лучшей муки твердых сортов пшеницы0336
  • Добавление шпината и помидоров в манную крупу для повышения питательной ценности и цвета блюд
  • Совершенство «Al dente» за 10 минут
  • Торговая марка, пользующаяся доверием шеф-поваров и потребителей за качественный вкус и надежную работу

Код UPC:10076808002154

4 : Обычно отгружается в течение 1 рабочего дня

Посмотреть все Паста Barilla

  • Barilla 12 унций. Трехцветная паста Rotini — 16 шт. в упаковке

    30,49 долл. США за упаковку

    плюс

Specs
Quantity 16/Case
Shipping Weight 13.48 lb.
Features Kosher

Made in America

Non-GMO

Тип зерна Твердая пшеница

Триколор

Размер упаковки 12 унций.
Общий размер корпуса 12 фунтов
Тип Пенне ригате

Приготовьте разнообразные фирменные блюда из пасты с этой трехцветной пастой пенне ригате Barilla. Большой диаметр и выступы этой универсальной нарезки макарон позволяют соусам прилипать ко всей поверхности лапши, что делает ее идеальной парой для мясных, молочных и томатных соусов и овощей. Используйте его для подачи основных итальянских блюд, таких как водка пенне алла или пенне алл’аррабиата, или для подачи простых, но элегантных блюд, приготовленных из свежих местных ингредиентов, таких как спелые помидоры и базилик, или ингредиентов со всего мира, таких как чесночный сливочный соус с пармиджано-реджано. . Это также идеальный выбор для запеченных блюд и салатов из макарон, а оранжевая, натуральная и зеленая лапша поможет повысить визуальную привлекательность ваших блюд. Независимо от способа приготовления паста Barilla пользуется доверием итальянских поваров и остается брендом пасты № 1 в Италии благодаря своей надежной текстуре и способности дополнять свежие ингредиенты и насыщенный вкус.

Эта паста изготовлена ​​из манной крупы высшего качества из твердых сортов пшеницы, что обеспечивает великолепный вкус и текстуру «аль денте», которую так жаждут ваши клиенты каждый раз. Манная крупа в сочетании со шпинатом и помидорами не только придает макаронам цвет, но и повышает их питательную ценность! Для приготовления используйте 4-6 литров воды на фунт пасты. Доведите до кипения и добавьте соль по вкусу. Добавьте макароны в кипящую воду, осторожно перемешайте и снова доведите до кипения. Для пасты «аль денте» варите без крышки 10 минут, периодически помешивая. Для более нежной пасты варите еще минуту. Снять с огня и хорошо процедить. Просто добавьте предпочитаемые ингредиенты, тарелку и подавайте!

В 1877 году Пьетро Барилла открыл магазин хлеба и макарон в Парме, Италия, с мечтой снабжать свою общину вкуснейшим хлебом и макаронами ручной работы, чтобы подавать их к семейным столам. Пьетро и его сын Риккардо неустанно трудились, чтобы ежедневно производить и доставлять свою продукцию на улицы Пармы, и с годами начали приобретать более передовые технологии для производства макаронных изделий и складские помещения, чтобы не отставать от спроса. После многих лет успеха и расширения, благодаря своей приверженности качеству, аутентичным продуктам и страсти к инновациям, Barilla с тех пор позиционирует себя как ведущего в мире производителя промышленных макаронных изделий. Это остается итальянской семейной компанией, которая занимается производством высококачественных, питательных продуктов, поддерживая экологически устойчивый производственный процесс от поля до вилки.

Вниманию жителей штата Калифорния: Опора 65 Предупреждение

Этот продукт может подвергнуть вас воздействию химических веществ, включая свинец, которые, как известно в штате Калифорния, вызывают рак, врожденные дефекты или другие нарушения репродуктивной функции. Для получения дополнительной информации посетите веб-сайт www.p65warnings.ca.gov.

Ресурсы и файлы для загрузки

Для просмотра информации об этом продукте требуется программа просмотра PDF. Загрузить программное обеспечение Adobe Acrobat

  • Типы пасты

    • Заменить заголовок здесь

    4.5 stars from 2 reviews

    great penne barillas pasta spaghetti taste adds appeal barilla cheese

    Customer Reviews

    Arrange byMost HelpfulHighest RatingLowest RatingDate

      «>

    The Barilla 12 oz . Трехцветная паста Penne Rigate — это захватывающее сочетание вкуса и легкости. Это так легко сделать, и нет необходимости напрягаться при приготовлении, потому что все кусочки пенне имеют одинаковый размер. Он тоже имеет прекрасный вкус.

    Питер Р. от Marco Bowlo’s LLC на 03/02/2021

    Barill это добавляет визуальную привлекательность и прекрасный вкус

    Nichollas R. на  18.02.2021

    Фото и видео, отправленные пользователем

    Если вы использовали этот продукт, войдите в систему и оставьте отзыв, чтобы сообщить нам и другим клиенты, что вы думаете об этом.